凝膠成像儀是用于蛋白質(zhì)、核酸凝膠成像及分析的專用儀器,系統(tǒng)能提供白光和紫外光以及藍(lán)光光源進(jìn)行拍攝凝膠。為了保證凝膠成像儀的有效使用,實(shí)現(xiàn)對(duì)凝膠電泳成像的有效控制,確保產(chǎn)品實(shí)現(xiàn)過程的質(zhì)量,**須掌握儀器的正確操作以及維護(hù)保養(yǎng)。
什么是凝膠成像儀
凝膠成像儀是用于蛋白質(zhì)、核酸凝膠成像及分析的專用儀器,系統(tǒng)能提供白光和紫外光以及藍(lán)光光源進(jìn)行拍攝凝膠。為了保證凝膠成像儀的有效使用,實(shí)現(xiàn)對(duì)凝膠電泳成像的有效控制,確保產(chǎn)品實(shí)現(xiàn)過程的質(zhì)量,**須掌握儀器的正確操作以及維護(hù)保養(yǎng)。
凝膠成像儀的使用環(huán)境
儀器應(yīng)放置在室溫15-30℃,相對(duì)濕度不大于80%的環(huán)境中工作。放置儀器的工作臺(tái)應(yīng)平坦、牢固、結(jié)實(shí),不應(yīng)有振動(dòng)或其他影響儀器正常工作的現(xiàn)象。
凝膠成像儀的種類及用途
(1)普通凝膠成像分析系統(tǒng):可以對(duì)蛋白電泳凝膠,DNA凝膠樣品進(jìn)行圖象采集并進(jìn)行定性和定量分析,樣品包括:EB、SYBR Green、SYBR Gold、Texas Red、GelStar、Fluoroscecin、 Radiant Red等染色的核酸監(jiān)測(cè);以及Coomassie Blue、SYPRO Orange、各種染色的蛋白質(zhì)凝膠如考染等。(或UV,EB和有色及可見樣品成像)。
(2)化學(xué)發(fā)光成像分析系統(tǒng):成像范圍涵蓋UV,EB,化學(xué)發(fā)光、紫外-熒光、有色及可見樣品成像。
(3)多色熒光成像分析系統(tǒng):成像范圍涵蓋UV,EB,化學(xué)發(fā)光、多色熒光熒光、有色及可見樣品。
(4)多功能活體成像分析系統(tǒng):UV,EB,化學(xué)發(fā)光、多色熒光熒光、有色及可見樣品成像和離體組織和小型動(dòng)物,及大型型動(dòng)物。
凝膠成像儀具體可以用于哪些實(shí)驗(yàn)分析?
具體從使用分析的角度來看,凝膠成像系統(tǒng)可以應(yīng)用于分子量計(jì)算,密度掃描,密度定量,PCR定量等生物工程常規(guī)研究。
(1)分子量定量
對(duì)于一般常用的DNA膠片,利用分子量定量功能,通過對(duì)膠上DNA Marker條帶的已知分子量注釋,自動(dòng)生成擬合曲線,并以它衡量得到未知條帶的分子量。通過這種方法所得到的結(jié)果較肉眼觀察估計(jì)要準(zhǔn)確很多。此方法也適用于對(duì)PAGE蛋白膠條帶的分子量測(cè)定。
(2)密度定量
一般常用的測(cè)定DNA(脫氧核糖核酸)和RNA(核糖核酸)濃度的方法是紫外吸收法,但它只能測(cè)定樣品中的總核苷酸濃度,而不能區(qū)分各個(gè)長(zhǎng)度片段的濃度。利用凝膠成像系統(tǒng)和軟件,先將DNA膠片上某一已知其DNA含量的標(biāo)準(zhǔn)條帶進(jìn)行密度標(biāo)定以后,可以方便的單擊其他未知條帶,根據(jù)與已知條帶的密度做比較,可以得到未知DNA的含量。此方法也適用于對(duì)PAGE蛋白膠條帶的濃度測(cè)定。
(3)密度掃描
在分子生物學(xué)和生物工程研究中,常用到的是對(duì)蛋白表達(dá)產(chǎn)物占整個(gè)菌體蛋白的百分含量的計(jì)算。傳統(tǒng)的方法是利用專用的密度掃描,但利用生物分析軟件,結(jié)合白光照射的凝膠成像獲取圖片,就能完成此項(xiàng)工作。
(4)PCR定量
PCR定量主要是指,如果PCR實(shí)驗(yàn)擴(kuò)增出來的條帶不是一條,那么可以利用軟件計(jì)算出各個(gè)條帶占總體條帶的相對(duì)百分?jǐn)?shù)。就此功能而言,與密度掃描類似,但實(shí)際在原理上并不相同。PCR定量是對(duì)選定的幾條帶進(jìn)行相對(duì)密度定量并計(jì)算其占總和的百分?jǐn)?shù),密度掃描時(shí)對(duì)選擇區(qū)域生成縱向掃描曲線圖并積分。
日常維護(hù)與保養(yǎng)
(1)凝膠成像儀的維護(hù)保養(yǎng)周期一般是在兩周左右。儀器需保持清潔,表面外周干凈清潔;打開儀器及軟件,觀察軟件數(shù)據(jù)線是否正常接觸,且軟件操作功能完好。
(2)儀器電腦專輯要專用,以免感染電腦病毒,導(dǎo)致無法使用,同時(shí)禁止重裝系統(tǒng),因?yàn)橹匮b后儀器軟件需要重新**才能使用。
(3)暗箱的關(guān)門操作要使用正確的關(guān)門方法。具體過程為將暗箱門掩**60度左右位置,放手,依靠重力,門自行關(guān)閉,需要注意的是,忌用力推動(dòng)關(guān)閉暗箱門。
(4)在平時(shí)的使用和保養(yǎng)過程中,要注意保持紫外燈箱及投影白光板的清潔,以免影響凝膠成像儀凝膠成像的效果。
(5)在操作凝膠成像儀的過程中,除了要正確使用儀器外,還需要嚴(yán)格遵守實(shí)驗(yàn)室的規(guī)定。
應(yīng)用場(chǎng)景
一般在實(shí)驗(yàn)室使用較多。
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