發(fā)光試劑由化學反應(yīng)釋放的能量引發(fā)周圍的的物質(zhì)使其達到激發(fā)態(tài)，被激發(fā)的物質(zhì)再通過光輻射衰減能量回到基態(tài)的過程。

發(fā)光試劑的發(fā)光原理

由化學反應(yīng)釋放的能量引發(fā)周圍的的物質(zhì)使其達到激發(fā)態(tài)，被激發(fā)的物質(zhì)再通過光輻射衰減能量回到基態(tài)的過程。

發(fā)光試劑的分類及介紹

（1）魯米諾試劑：化學名：3-氨基鄰苯二甲酰胺。

以3-硝基鄰苯二甲酸為原料與阱反應(yīng)，生成中間產(chǎn)物3-硝基鄰苯二甲酰一肚，繼而把后者分子中的硝基還原為氨基，即得到化學發(fā)光物質(zhì)——魯米諾。

（2）三苯基咪唑

三苯基咪唑在堿性介質(zhì)中被過氧化氫氧化，中間經(jīng)過二氧雜環(huán)丁烷衍生物階段，得到苯甲酰胺衍生物激發(fā)態(tài)，回到基態(tài)時發(fā)出熒光。

以氫化鈉/1,3-二甲基苯并咪唑作催化劑，苯甲醛在四氫呋喃中發(fā)生自身縮合得到2-羥基-1，2-二苯基乙酮。在1-丁基咪唑四氟硼酸鹽的存在下，后者與苯甲醛/醋酸銨發(fā)生反應(yīng)得到三苯基咪唑。

（3）光澤精化合物

9-氯吖啶在銅的催化下于140℃發(fā)生偶聯(lián)反應(yīng)，得到9，9'-聯(lián)吖啶，后者用硫酸二甲酯N-甲基化，得到光澤精。

（4）過氧化草酸酯類：例如雙-草酸酯。

（5）吖啶酯類

McCap 等合成了一系列吖啶酯類化合物，對該類試劑的化學發(fā)光機理研究表明，發(fā)光效率與試劑中的可解離酸性基團的 pKa有密切關(guān)系， pKa 一般應(yīng)小于 11 。

吖啶酯類化合物是一類很有前途的非放射性核酸探針標記物，用作 DNA 的發(fā)光探針，發(fā)光量子產(chǎn)率高，穩(wěn)定性好，標記物對雜交反應(yīng)的動力學和雜交體的穩(wěn)定性無影響，可以直接在堿性介質(zhì)中進行化學發(fā)光反應(yīng)。

發(fā)光試劑的應(yīng)用

（1）有機酸

一般是先將有機酸衍生成熒光物質(zhì)經(jīng)色譜分離后進行化學發(fā)光檢測。

在**醫(yī)學上，草酸是一個重要的檢測項目，可以直接用氧化化學發(fā)光反應(yīng)測定尿液和草酸二乙酯中的草酸鹽及游離的草酸。另外還可以測定苯酮尿癥病人的尿液的苯丙酮酸的含量。

此外酶聯(lián)偶合反應(yīng)也可以用于某些有機酸的化學發(fā)光分析。

（2）有機堿

有些堿如腎上腺素等可直接氧化而發(fā)光。

（3）氨基酸

氨基酸分析方法的改進有利于推動生物技術(shù)、基因工程、 DNA 重組和基因克隆等的發(fā)展。由于*大多數(shù)氨基酸沒有內(nèi)源熒光特性，因此用過氧草酸鹽體系測定氨基酸需將其衍生成熒光物質(zhì)。

（4）糖類

光澤精體系可用于測定一些還原性物質(zhì)，如乳糖、葡萄糖，用于抗壞血酸和脫氫抗壞血酸的分析測定有很高的靈敏度。

發(fā)光試劑的使用注意事項

（1）實驗前，先將實驗中所需的所有試劑及待測樣品從冰箱中取出，待溫度與室溫（25℃）平衡1小時以上后使用。

（2）加樣前應(yīng)將所用試劑和待測樣本分別充分混勻。

（3）酶結(jié)合物和抗體混勻時，切忌產(chǎn)生大量氣泡。

（4）實驗中用于凍干品復溶和稀釋濃縮洗滌液所用的蒸餾水或去離子水應(yīng)保證質(zhì)量。

（5）凍干品加入蒸餾水或去離子水后，應(yīng)蓋上膠塞后靜置，待固體物質(zhì)完全溶解后，再將試劑瓶反扣在實驗臺上，讓附著在瓶蓋上的固體物質(zhì)溶解，然后充分混勻后待用。

（6）試劑每個批號均*立優(yōu)化，請不要混用或稀釋本試劑以免降低敏感性。

（7）適當?shù)胤忾]和洗滌膜片**關(guān)重要。使用前配置化學發(fā)光試劑，配置足夠覆蓋膜片即可，棄去使用過的混合試劑，使用干凈取樣頭取用每種試劑。

發(fā)光試劑盒的保存

（1）保存條件

① 試劑盒應(yīng)放置于2～8℃冰箱中存放；

② 試劑盒在取用過程中禁止顛倒，以避免試劑被污染；

③ 有特殊要求的試劑應(yīng)嚴格按照操作說明書要求的保存條件保存。

（2）保存時間

① 未開封試劑盒于2～8℃保存時，可在有效期之內(nèi)正常使用；

② 已開封試劑盒每次使用后需及時放回2～8℃冰箱內(nèi)保存，應(yīng)盡可能在開封后1個月內(nèi)使用（按說明指示的開封的半成品有效期計算，盡量在半成品的有效期內(nèi)用完）。

檢測項目

主要有血常規(guī)、尿常規(guī)、肝功能、腎功能、心肺功能性檢查、生化檢驗、血清免疫檢驗、微生物檢驗、血液及骨髓學檢驗、組織切片病理檢查等。

應(yīng)用場景

一般在醫(yī)院的檢驗科或者化學實驗室使用。